源井生物干货分享:细胞购买避坑指南
Ø 明确细胞全称,一般包含有物种来源(人/小鼠等),组织来源(如肝癌细胞HepG2)等信息。
Ø 区分原代细胞还是永生化细胞系。原代细胞能保持原有的遗传特征,适用于药物测试、细胞分化和转化等要求较高的实验;永生化细胞系具有价格低、易培养、种类多、产量高的优势。
Ø 要求商家提供STR鉴定,STR报告能证明细胞身份,避免交叉污染或身份错误。未鉴定的细胞可能导致实验不可重复、论文被撤稿(Nature/Science等高分期刊要求投稿人提供STR鉴定)。
Ø 验证报告真实性,核对STR数据库(如ATCC、DSMZ)匹配度。
Ø QC检测报告必须包含:细菌、真菌、支原体检测。
询问商家是否提供细胞培养手册、冻存/复苏操作视频、污染排查指南。
Ø 进阶实验指导,如CRISPR基因编辑:询问是否提供转染条件、编辑效率验证数据。
Ø 验收与暂存:检查包装完整性、干冰余量及冻存管是否融化。
短期保存:转移至-80℃冰箱(≤1周);长期保存:-80℃过夜后转入液氮罐。
Ø 如果使用,需要进行复苏步骤
① 取冻存管置于干冰转移至细胞房;
② 预热水浴锅至37℃,冻存管浸入水面下(勿淹没管口),快速晃动至仅剩绿豆大小的小冰块;
③ 酒精擦拭冻存管,转移细胞悬液至含6-7mL完全培养基的离心管;
④ 离心:按说明书参数离心(一般1100rpm,4min),弃上清,用1mL培养基重悬;
⑤ 接种至含4mL完全培养基的T25瓶,十字摇匀,放入培养箱培养。
Ø 验收与预处理
75%酒精消毒细胞瓶,检查漏液、浑浊情况;在显微镜下观察细胞状态,放入培养箱静置2小时。
Ø 状态确认与处理
静置结束后,在显微镜下观察并拍照存档(售后凭证),后续定期记录生长状态。
Ø 根据细胞密度传代
贴壁细胞:密度>80%:直接传代;密度<80%:半量换液,待密度达标后传代。
悬浮细胞:离心(1100rpm,5min),弃上清,10mL培养基重悬;分瓶培养,按密度调整传代比例。
(1)权威细胞库平台
Ø ATCC(美国典型培养物保藏中心)
Ø DSMZ(德国微生物和细胞培养物保藏中心)
Ø JCRB(日本研究生物资源中心)
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Ø 覆盖范围广:包含超6000种现货细胞,涵盖生命科学各领域,包括KO细胞、野生型细胞、Cas9细胞、Luc/EGFP细胞、干细胞等。
Ø 严格质控:每株细胞提供STR鉴定,保障细胞身份准确。
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